生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化酸。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡，氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。

试剂盒组分: （保存温度4℃）

本试剂盒适用于血清、血浆、组织匀浆、细菌、细胞培养上清及其它生物体液。

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。细胞培养液、上清样品收集：取细胞培养上清液500ul，4度，6000rpm离心5-10min；取上清。 组织样品收集：将组织块用PBS漂洗干净，制成匀浆液，4 度离心(3500r/min, 30min) 取上清液。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 标准品/样品稀释液（1×）的配置：1ml标准品/样品稀释液（10×）+9ml去离子水。

3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注S1,S2,S3,S4,S5,S6, blank,每管中各加入标准品/样品稀释液（1×）100ul，第一管S1中再加入标准品（200nmol/ml）100ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸100ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第六管（S6）中吸出100ul弃去，第七管为空白对照。标准曲线浓度为: 100、50、25、12.5、6.25、0.312、0 nmol/ml。

4. 样品的准备：取和检测样品相同数量的1.5ml离心管并编号，每管中分别加入对应检测样品100ul。

5. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

1. 加提取液：将配置/分装好的标准品及待测样品放入1.5ml离心管架（1.5ml双面板）上，每管中分别各                         

加入提取液100ul，震荡混匀后，室温静置20分钟。

2. 加显色液：每孔加入显色液400ul，混匀后90℃水浴10分钟。

3. 读    数：将反应好的样品及标准品，8000转离心1分钟，取上清100ul对应加入微孔板中，30分钟内

用酶标仪在532nm处读OD值。

结果判断与计算：

1. 所有OD值建议减除空白孔值后再进行计算，如空白孔OD低于0.1，也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

注意事项

1. 请自备1.5ml离心管及离心管架、水浴锅等常规检测设备及仪器。

2. 检测时所有试剂都要恢复到室温，试剂盒开封后剩余试剂放回袋中1 个月内用完。

3. 实验前请认真仔细阅读此说明书，说明书以试剂盒内纸质版为准。

4. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！