检测意义：

一氧化氮在临床上越来越受研究人的关注，因为一氧化碳作为一种信号分子，在人体多个系统发挥重要作用，并与多种重大疾病的发生发展相关，越来越多的研究表明，NO在治疗心血管疾病和许多其他重大的慢性疾病中具有重要作用，NO的主要生理功能包括对心血管系统、免疫系统、循环系统、中枢系统和泌尿生殖系统的作用，一氧化氮测试对于临床诊断及疾病发展和疗效监控有潜在的意义。

试剂盒组分: （保存温度4℃）

本试剂盒可用于检测细胞、组织、血浆、血清、红血球、植物等样品。

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集：应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。细胞培养液、上清样品收集：取细胞培养上清液500ul，4度，6000rpm离心5-10min；取上清。 组织样品收集：将组织块用PBS漂洗干净，制成匀浆液，4 度离心(3500r/min, 30min) 取上清液。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 标准品/样品稀释液（1×）的配置：1ml标准品/样品稀释液（10×）+9ml去离子水。

3. 标准品配制：取8个1.5ml离心管，分别标注S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7, blank,每管中各加入标准品/样品稀释液（1×）200ul，第一管S1中再加入标准品（40 umol/L）200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸200ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释，从第七管（S7）中吸出200ul弃去，第八管为空白对照。标准曲线浓度为:20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0 umol/L。

4. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

提示：样品必须清楚透明，否则影响检测结果。

1. 加    样：微孔板中分别对应加入配置好的标准品及待测样品100ul。

2. 加提取液：微孔板中每孔各加入提取液100ul，室温静置3分钟。

3. 读    数：将微孔板用酶标仪在540nm处读OD值记录为A1。

4. 加显色液：每孔加入显色液100ul，室温静置反应5分钟，

5. 读    数：将反应好的微孔板用酶标仪在540nm处读OD值记录为A2。

结果判断与计算：

1. OD值A2-A1,后根据标准曲线进行计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘以稀释倍数即可。

注意事项

1. 检测时所有试剂都要恢复到室温，试剂盒开封后剩余试剂放回袋中1 个月内用完。

2. 实验前请认真仔细阅读此说明书，说明书以试剂盒内纸质版为准。

3. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！