焦磷酸测序介绍

本实验室产品有Qiagen公司Q48焦磷酸测序仪(可检测100bp左右的长度），高度精确的甲基化定量分析和精准SNP分析，适用于各种研究领域，包括癌症和表观遗传学研究

1、DNA甲基化检测（m5C突变型）

n  读长：可长至100bp 

n  检测范围：能够检测更多特殊结构（如GC含量，重复、发夹）

n  流程简洁：不用构建克隆，直接测序（等于将全部克隆子全测了计算甲基化率）

n  灵敏度高：是DNA甲基化检测的金标准

2、snp检测（单碱基或者多碱基突变都可）

n  微量上样 ：珍贵样品，上样量仅需Q96的25% 

n  低频突变 ：可检测3%左右的低频突变 

服务简介：

介绍：焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术是由4种酶（DNA 聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)、荧光素酶(luciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。 

n全套试剂均用Qiagen，保证质量稳定 

n定量分析癌症相关基因的突变 

n 定量分析单个和多个CPG位点 

n 确定特定区域的CPG 甲基化状况 

n序列背景提供内置的分析参照 

n后续分析简洁灵活

基本流程：

nDNA亚硫酸盐处理 

n 产物回收

n PCR扩增（1条修饰引物+1条普通扩增引物） 

n焦磷酸测序（1条普通测序引物）

n后续数据分析

客户提供：

1、目的序列

n提供原始序列并标记出目的序列（黄色）

n 重点区域请加粗、CG位点请加双下划线（红色）

n请告知每段序列在费用上可承受几个反应（比如这段序列很长，但经费预算只能做一个反应，我们就会把这个反应尽可能的集中在最重要的部分）

n 由于引物不能含有CG位点（CG位点的甲基化会影响扩增效率），所以引物设计的位置是有限制的，不是每个地方都能设计引物。

2、样品要求

n  DNA或者血液、组织等 （DNA浓度达到30ng/ul，纯度为1.8左右，量达到30ul，具体还得看反应个数）

n  客户如提供亚硫酸盐处理过的DNA，本实验室不对样品是否处理彻底负责，仅对后续实验流程负责。最终交付：

1、结题报告

2、原始数据